CRM-ATX 魚腥藻毒素a校準(zhǔn)溶液Anatoxin-a(ATX-a)是一種藍(lán)藻毒素，與北美[1]和全球[2]的動(dòng)物死亡有關(guān)。CRM-ATX是一種經(jīng)認(rèn)證的校準(zhǔn)液，用于協(xié)助分析人員測(cè)定ATX-，每個(gè)安瓿中含有大約0.5毫升的ATX-a，以0.01%的乙酸溶解在甲醇水中(9：91，Viv)。

CRM-ATX是一種校準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CRM)，用于ATX-A的分析方法開(kāi)發(fā)和精確定量。CRM濃度使其適合于制備用于儀器校準(zhǔn)的稀釋系列，如用紫外吸收法(LC-UV)、熒光法(LC-FL)或質(zhì)譜法(LC-MS)檢測(cè)的液相色譜，以及用于回收實(shí)驗(yàn)的控制樣品。

ATX的準(zhǔn)備

ATX-a是從一種異青藤的藻類培養(yǎng)物中分離得到的。從細(xì)胞中提取毒素，經(jīng)層析純化后，真空干燥至無(wú)水形態(tài)[4.5]。將純化的ATX-a溶于9：91的脫氣甲醇中，用0.01%的乙酸溶解制得CRM溶液。溶液與聚四氟乙烯包覆攪拌棒和磁混合器完全混合，在氬氣下攪拌.在琥珀玻璃安瓿中預(yù)先加入氬，然后立即進(jìn)行火焰密封，每個(gè)安瓿中含有約0.5毫升的溶液。

同質(zhì)性：由于CRM-ATX 魚腥藻毒素a校準(zhǔn)溶液是一個(gè)真正的解決方案，所以安瓿之間的變化應(yīng)該很小。然而，大約0.8%的安瓿是隨機(jī)選擇的，ATX-a濃度是用LC-UV測(cè)量的。安瓿之間的變化不大于對(duì)一種溶液進(jìn)行復(fù)制分析時(shí)的變化，因此在整個(gè)安瓿范圍內(nèi)表現(xiàn)出可接受的同質(zhì)性。

穩(wěn)定性研究：已進(jìn)行了廣泛的研究，以確定CRM-ATX 魚腥藻毒素a校準(zhǔn)溶液在各種條件下的穩(wěn)定性。ATX-a在堿性溶液中不穩(wěn)定，對(duì)光敏感[10]。對(duì)以前的ATX-a制劑的可行性研究表明，貯存在+4°C的水溶液-儲(chǔ)存酸化甲醇/水的溶液具有良好的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。在幾種溫度(-80°C，-20°C，+4°℃，+25 C和+37°C)下，對(duì)CRM-ATX進(jìn)行了長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究。ATX--在-20°C儲(chǔ)存，在+4°C下分解小于3%，10天后在+37°C保存時(shí)，其降解率小于2%。

結(jié)構(gòu)確認(rèn)和純度評(píng)估

采用500 MHz核磁共振譜、LC-MS[6J，LC-UV]、毛細(xì)管電泳-紫外檢測(cè)(CE-UV)[7]和液相色譜-化學(xué)發(fā)光氮檢測(cè)(LC-CLND)[8]等技術(shù)對(duì)該毒素的純度進(jìn)行了檢測(cè)。用核磁共振[9]和四極飛行時(shí)間(QToF)質(zhì)譜確證了ATX-a的分子結(jié)構(gòu).[M+H]~*離子在166.12269Da，在理論單同位素質(zhì)量166.12264 Da(=0.30ppm)的0.05MDA范圍內(nèi)，獲得了[M+H]~*離子的串聯(lián)質(zhì)譜譜，如圖2.NMR、LC-MS、LC-UV和LC-CLND所示，未觀察到主要雜質(zhì)。